Reproducibilidad del cultivo celular

Maximizar la relevancia y la reproducibilidad del cultivo de células A549 utilizando Medios sin FBS

Los científicos están utilizando métodos in vitro para responder importantes preguntas de investigación e implementar estrategias para maximizar la confiabilidad y la relevancia humana de estos métodos. Una estrategia es reemplazar el uso de Suero Fetal Bovino (FBS), una mezcla indefinida y variable de biomoléculas, en medios de cultivo celulares con propiedades definidas químicamente o medio libre de suero. En este estudio, las células A549, una línea celular similar al alveolar pulmonar humano comúnmente utilizada en enfermedades respiratorias investigación, pasaron de un medio de cultivo que contenía FBS a un medio sin FBS. Una transición exitosa se determinó en base al análisis de la morfología y funcionalidad celular. Después de la transición a comercialmente medio disponible CnT-Prime Airway (CELLnTEC) o X-VIVO™ 10 (Lonza), las células se caracterizaron por evaluación microscópica y cálculo del tiempo de duplicación. Su genotipo, morfología y funcionalidad fueron evaluado mediante el control de la expresión de marcadores genéticos para tipos de células pulmonares, producción de surfactante, citocina liberación, la presencia de cuerpos multilaminares y la viabilidad celular después de la exposición al dodecilsulfato de sodio. 

Nuestros resultados mostraron que las células A549 lograron la transición con éxito a medios libres de FBS en condiciones sumergidas y de interfaz aire-líquido. Las células cultivadas en medio X-VIVO™, 10 imitaron las características celulares de los medios suplementados con FBS, mientras que las cultivadas en medio CnT-Prime Airway demostraron características posiblemente más reflexivo de las células epiteliales alveolares humanas normales

Los científicos confían en modelos de células y tejidos humanos para estudiar los mecanismos de enfermedad o toxicidad. Para maximizar la reproducibilidad y la relevancia de la investigación in vitro, es importante eliminar los derivados de animales componentes en medios de cultivo celular, como suero, hidrolizados, crecimiento, factores, hormonas, proteínas, péptidos, lípidos, factores de adhesión y aminoácidos. 

En concreto, la comunidad científica ha reconocido que suero bovino fetal (FBS) es una fuente potencial de variabilidad en in vitro estudios (van der Valk et al., 2004, 2010, 2018; Zhao y Klimecki, 2015; Karnieli et al., 2017; OCDE, 2018). Si bien un laboratorio individual puede comprar grandes cantidades de un lote particular de FBS, esto no contribuir a aumentar la reproducibilidad entre laboratorios o la reproducibilidad intralaboratorio a perpetuidad.

Como una mezcla compleja de una composición indefinida de biomoléculas, con un estimado de 1800 proteínas y >4000 metabolitos, FBS tiene una variación sustancial de un lote a otro (van der Valk et al., 2010, 2018; Gstraunthaler et al., 2013). 

 

Los componentes indefinidos y variables pueden conducir a interacciones inesperadas y no deseadas en los estudios y podría resultar en discrepancias en los datos de estudios in vitro que utilizan FBS como cultivo celular suplemento (Bilgen et al., 2007; Crabb´e et al., 2017). Esta variación en Recientemente se demostró que la composición contribuye a la interacción entre laboratorios. Variabilidad del crecimiento celular y el comportamiento de las células A549 (Barosova et al., 2021). La presencia de FBS en los medios también induce cambios fenotípicos potencialmente, puede complicar el análisis de los datos obtenidos de células cultivadas (Zhao y Klimecki, 2015; Baker, 2016; Malm et al., 2018; Marigliani et al., 2019).

Extraido de: https://www.sciencedirect.com/journal/toxicology-in-vitro

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